HTRF 高范圍胰島素測定顯示與人胰島上清液中的 RIA 具有好的相關(guān)性。回歸線的斜率為 0.9，接近理想線，證明了測定的可靠性。
對小鼠和大鼠 B 細(xì)胞的驗證:將 MIN6 小鼠 ?-細(xì)胞和 INS-1E 大鼠 ?-細(xì)胞接種到 24 孔板中（500 µL 培養(yǎng)基中，每孔 400,000 個細(xì)胞），然后在 37°C - 5% CO2 的全培養(yǎng)基中培養(yǎng) 6 天。刺激前，用 KRB 緩沖液洗滌細(xì)胞，并在 KRB 緩沖液（不含葡萄糖）中于 37°C 進(jìn)行細(xì)胞靜止步驟 2 小時。用 250 µL 含有濃度不斷增加的葡萄糖的 KRB 緩沖溶液刺激細(xì)胞。MIN6 細(xì)胞分泌 10 分鐘和 30 分鐘后，或 INS-1E 細(xì)胞分泌 2 小時后，收集細(xì)胞上清液*并使用 HTRF 檢測試劑對胰島素進(jìn)行定量。每個處理條件一式三份進(jìn)行測量（誤差線代表SEM）。
大鼠胰島驗證:將雄性 Wistar 大鼠新鮮分離的胰島在含有 2.8 mM 葡萄糖（非刺激性基礎(chǔ)條件）或 8.3 mM 葡萄糖（刺激性條件）的 KRB 緩沖液中于 37°C 孵育 30 分鐘（5 個胰島/管；4 管/健康）狀況）。孵育期結(jié)束時，收集上清液*并使用胰島素高范圍試劑盒測定胰島素濃度。
* 樣品由法國蒙彼利埃大學(xué)糖尿病藥理學(xué)實(shí)驗室、Max Mousseron 生物分子研究所 (IBMM)、CNRS UMR-5247 藥學(xué)院慷慨提供
對離體灌注大鼠胰腺的驗證:用含有 1.5 g/L 葡萄糖 +/- 10 µM 槲皮素的 KRB 緩沖液灌注從雄性 Wistar 大鼠中分離的胰腺。向培養(yǎng)基中連續(xù)通入 95% O2 ± 5% CO2 并保持在 37.5°C。選擇恒定壓力以提供 2.5 至 3.3 mL/min 之間的流速。隨著時間的推移收集流出液*（13 個部分），并使用試劑盒試劑測量胰島素濃度。
* 樣品由法國蒙彼利埃大學(xué)糖尿病藥理學(xué)實(shí)驗室、Max Mousseron 生物分子研究所 (IBMM)、CNRS UMR-5247 藥學(xué)院慷慨提供
對人類胰島的驗證:將來自 3 個人胰腺（A、B 和 C）的胰島置于 24 孔板中（50 個胰島/孔，3 孔/條件），并在含有 2.8 mM 葡萄糖的 KRBH 緩沖液中于 37°C 預(yù)孵育 1 小時。孵育延長一小時并收集上清液以測量基礎(chǔ)胰島素分泌。接下來用 16.7 mM 葡萄糖在 37°C 下刺激胰島 1 小時，然后收集上清液以測量葡萄糖刺激的胰島素分泌。然后用酸-乙醇溶液裂解胰島24小時，收集裂解物并離心。使用胰島素高范圍試劑盒試劑對上清液*和裂解物*中的胰島素進(jìn)行定量。
* 樣本是在法國蒙彼利埃大學(xué)醫(yī)院再生醫(yī)學(xué)和生物治療研究所 (IRMB) 糖尿病細(xì)胞治療實(shí)驗室生成的。
掃一掃，關(guān)注微信
當(dāng)前位置：